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生物?环境

微生物培养中のサンプリング操作は増殖に影响を及ぼす ?火炎杀菌によりフラスコ内の颁翱2浓度が上昇?

国立大学法人筑波大学 生命環境系 高橋将人 博士研究員と青柳秀紀 教授は、培養中の微生物に対する火炎殺菌操作がフラスコ気相部および微生物に及ぼす影響を、世界で初めて報告しました。

微生物を振盪フラスコ培养する际、微生物や培养液の挙动を分析するためにサンプリングを実施します。サンプリングにおいては、フラスコの振盪の中断、クリーンベンチへのフラスコの移动、フラスコ上部にある培养栓の开封、フラスコおよび培养栓の火炎杀菌といった一连の操作が行われます。これらの操作が、微生物に何かしらの影响を及ぼすことは、微生物培养に携わる熟练者は経験的に感じていた可能性はあります。しかしながら、その详细を科学的に捉えた研究はほとんどありません。本研究グループはこれまでに、振盪を中断せずにサンプリングできるシステムや、それと併せて二酸化炭素(颁翱2)や酸素(翱2)浓度をモニタリングできる独自技术を开発し、フラスコ内の気相环境(特に颁翱2)が、培地と同様に重要な培养因子であることを明らかにしてきました。

本研究では、サンプリングを行う际の火炎杀菌操作に注目し、ブンゼンバーナーによって生じる燃焼ガスが、フラスコ気相部の颁翱2浓度に及ぼす影响を种々の条件で実测し、また、高い颁翱2浓度を有した燃焼ガスが叁角フラスコの上部から流入する様子を、流体解析することに成功しました。これらの知见に基づき、火炎杀菌操作の一时的な颁翱2浓度の上昇を模倣し、振盪フラスコ培养した结果、微生物の振盪フラスコ培养中に一般的に実施してきた火炎杀菌操作は、微生物の増殖に影响を及ぼすことが明らかとなりました。本研究成果は、振盪フラスコ培养法の未制御因子の理解に寄与すると共に、再现性の高い培养の実现や新たな培养条件の拡张(それに伴う新规な微生物机能や新规微生物资源の开拓)にも贡献できる可能性があり、微生物培养関连分野において产业面でも新たな潮流を生むことが期待されます。



図 微生物培養の一般的なサンプリング過程(a, 振盪の中断; b, クリーンベンチ内での無菌作業; c, 培養栓の開封; d, 火炎殺菌操作; e, 培養液の採取) 時計まわりにサンプリング時の操作を示しており、グレー部分はクリーンベンチ内の操作を示しています。火炎殺菌操作が繰り返されていることがわかります。

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